問118(生物)
マクロファージをリポ多糖で刺激して得た培養液を採取し、この培養液中のサイトカインXの濃度をサンドイッチ ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)法で定量することにした。
各試料をマイクロプレートに採取し反応を行った後、450nmの吸光度を測定した。
サイトカインXの標準物質を用いて標準曲線(検量線)を作成したところ、下図のようになった。
この測定に関する記述として適切なのはどれか。2つ選べ。
110-118
1.この培養液の測定値が吸光度1.5であった場合、培養液を希釈して再測定することが必要である。
2.10倍希釈した培養液の測定値が吸光度0.6である場合、もとの培養液中のサイトカインX濃度は約600pg/mLである。
3.培養液に含まれる別のサイトカインYを測定するためには、サイトカインXの測定とすべて同じ抗体を利用できる。
4.サンドイッチELISA法では抗原に対する2種類の抗体が使われるが、それぞれの抗体が認識するエピトープは異なる。
5.この培養液の測定で発色が検出限界以下だった場合、標準曲線(検量線)の測定の場合よりも反応時間を長めにしてもよい。
問118の解説
1.「〇」標準曲線より、吸光度の上限が0.9辺りなので、吸光度が1.5であった場合、培養液を希釈し、吸光度が標準曲線の範囲内に入るようにしてから、再測定する必要があります。
2.「×」標準曲線より、吸光度0.6のサイトカインX濃度は、約600pg/mLです。
これが、10倍希釈した培養液での測定値なら、元の培養液中のサイトカインX濃度は、約6000pg/mLです。
3.「×」ELISA法は、抗原抗体反応を用いた測定のため、サイトカインYを測定するためには、サイトカインXと異なる、サイトカインYに特異的な抗体を使います。
4.「〇」サンドイッチELISA法では、抗原の違うエピトープを認識する、2種類の抗体を使います。
(抗原の同じエピトープを認識する抗体だと、競合現象がおこり測定誤差となってしまいます)
5.「×」測定条件(反応時間など)を変えると、標準曲線との比較ができなくなるので、発色が検出限界以下だった場合、試料を濃縮し再測定します。
問118の解答:1と4